martes, 29 de mayo de 2012

ANÁLISIS DE D.N.A.

PRACTICA No. 6
ANÁLISIS DE D.N.A.

OBJETIVO
Mediante unas sencillas técnicas se puede extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.

FUNDAMENTO
(Investigar)

MATERIAL Y EQUIPO
1 Mortero de porcelana                                 1 Vaso de precipitados
1 Tubo de ensaye                                            1 Agitador de vidrio
1 Pipeta o gotero                                            1 probeta
1  Microscopio                                                 1 porta y cubreobjetos
1 Paño o trozo de tela

SUSTANCIAS
Etanol absoluto                                                Cloruro de Sodio 2M
Sol. de dexosilato de sodio                          Arena
Sol. de naranja de metilo                             Agua destilada
Detergente lavavajillas

TÉCNICA
1.         Triturar medio hígado de pollo en un mortero. Añadir arena para que al triturar se puedan romper las membranas de y queden los núcleos sueltos.
2.         Añadir al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o puré.
3.         Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper.
4.         Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5.         Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina.
6.         A continuación se añade 1 centímetro cúbico de dexocilato de Sodio. (Nota: Si no se dispone de este producto puede sustituirse por un detergente lavatrastes). La acción de este detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.
7.         Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol de 96:. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN.
8.         Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.
9.         Esta práctica puede completarse con una tinción específica de ADN.
Tenemos que tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre la varilla de vidrio y depositarlas sobre un porta.

10.      Teñir durante unos minutos con un colorante básico.
11.      Observar al microscopio.

Anote sus observaciones:

CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son los constituyentes del DNA?
2. ¿Dónde están los puentes de hidrógeno en el DNA, y cuantos son:?
3.- ¿Qué es la secuenciación genética y como se da?

CONCLUSIONES   

BIBLIOGRAFÍA

ESQUEMAS
Realizar esquemas de lo observado en la práctica y el del DNA

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